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博来霉素致肺纤维化模型怎么做啊？ 需要具体步骤哦 >>>>>>>>休闲养生网回答： 休 闲 居 编 辑 1 材料和方法 1.1动物和材料 健康SD大鼠，雌雄不拘，体重180-240g（锦州医学院实验动物中心提供,动物合格证号[2000]038）。博莱霉素（商品名：博莱平阳Bleomycin，BLMA5）：批号000505，哈尔滨博莱制药有限公司生产。羟脯氨酸（HYP）试剂盒：购自南京建成生物工程研究所。 1.2实验方法 1.2.1实验分组 体重180-240克的健康SD大鼠60只，雌雄不拘，随机分为正常对照组和模型组。每组30只，对照组一次性气管内注入生理盐水0.1mL.100g-1，模型组按5mg.kg-1体重注入等容积BLMA5，所有动物于1、3、7、14、28d各处死6只，观察肺纤维化形成的病理变化。 1.2.2动物模型的复制 乙醚麻醉大鼠，将其仰卧固定于大白鼠实验台上，切开颈部皮肤，分离气管，用1mL注射器缓慢注入BLMA55mg.kg-1。注药后将动物直立并旋转，使药物在肺内均匀分布。尔后缝合皮肤，置动物于实验室内喂养。 1.2.3 病理标本取材及处理 乙醚麻醉大鼠，断头处死，完整分离出气管和肺，迅速于右下肺钳取多块1mm3肺组织薄片，放于3%戊二醛溶液中，按电镜常规进行标本制备。取左肺浸泡于10%中性甲醛溶液中，按体视学方法制备标本。取右肺余肺1g加入9mL0.86%冷生理盐水做肺组织 浆，留取上清液，于-70℃冰箱保存，按试剂盒说明书步骤进行HYP的统一测定。 1.2.4 光镜标本制作、观察和体视学测量：将左肺浸泡于10%中性甲醛溶液固定24小时后，从肺尖至肺底每隔3mm将肺脏横切成6-12块薄片，10%中性甲醛溶液继续固定72小时，乙醇梯度脱水，香柏油透明，石蜡定向包埋，连续切片，厚度6?m，选择每块标本的连续切片中第10片，HE染色，进行定性定量观察。每张切片观察5个视野，即肺上下左右四个固定视野，肺中部一个视野，在10倍物镜下，应用方网格测试系统（由丹麦Aarhus大学提供），借助CIAS-1000型细胞图像分析系统（北京大恒图像视觉分析系统提供）以点记数法[4]测算下列参数：肺泡体密度 (volume proportion of alveolar air, Vva)，肺间质体密度 (volume proportion of interinterstitial, Vvi)，肺血管体密度（volume proportion of capillary, Vvc）(其中Vvc参照系为肺间质)，分别取其平均值。再将每只大鼠的各个组织块取平均值。 1.3统计学处理:统计数据以SPSS10.0软件进行分析，组间比较采用配对t检验。 |